注射用重組人干擾素α2a是由高效表達人干擾素α2a基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的凍干制劑，含適宜穩定劑，不含防腐劑和抗生素[1]，主要用于治療病毒性疾病及腫瘤。水分含量是注射用重組人干擾素α2a的一項重要指標，影響藥品的外觀(guān)、性狀、含量、穩定性等。水分含量越低，藥品越能長(cháng)期穩定的儲存。

本文參照《中國藥典》2015年版通則0832水分測定法中容量滴定法，利用水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用技術(shù)測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，其原理為樣品在干燥爐內加熱，使其水分在高溫下蒸發(fā)釋放，蒸發(fā)出來(lái)的水分由干燥載氣（空氣或氮氣）推送入水分測定儀進(jìn)行測定[2]。聯(lián)用干燥爐可自動(dòng)完成測定，提高工作效率；密封蓋能夠保證樣品在測定過(guò)程中不受環(huán)境的影響，同時(shí)避免了樣品在滴定杯中的相互干擾，使滴定杯始終保持良好的狀態(tài)，測定結果重復性好，準確度高。

1實(shí)驗部分

1.1主要儀器

V30水分測定儀（METTLER TOLEDO）、Stromboli加熱爐樣品轉換器（METTLER TOLEDO）、超微量電子天平（芬蘭kibron）。

1.2試劑

無(wú)水甲醇（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、1 mg/mL費休氏試液（Merck）、2 mg/mL費休氏試液（Merck）、5 mg/mL費休氏試液（Merck）、固體標準水（Merck）。

1.3實(shí)驗樣品

注射用重組人干擾素α2a（長(cháng)春生物制品研究所有限責任公司）。

1.4測定步驟

1.4.1操作條件

加熱爐樣品轉換器加熱溫度：（150±2）℃；加熱爐樣品轉換器加熱時(shí)間：10 min；費休氏試液滴定度：1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL。

1.4.2樣品測定

啟動(dòng)儀器，加入適量無(wú)水甲醇，待儀器平衡后，用10μL微量進(jìn)樣器量取經(jīng)稱(chēng)量的10μL純化水（精確至0.01 mg）加入到滴定杯中，儀器顯示質(zhì)量后按“確定”鍵，儀器開(kāi)始自動(dòng)滴定，到達終點(diǎn)時(shí)，屏幕顯示費休氏試液的滴定度。按此法標定三次，取三次標定的平均值，即為本次費休氏試液的滴定度。

將注射用重組人干擾素α2a搗碎，稱(chēng)取樣品適量（精確至0.01 mg），記錄樣品質(zhì)量，將樣品密封后置于卡氏干燥爐上。在水分測定儀輸入樣品質(zhì)量，用費休氏試液滴定至終點(diǎn)。

2結果與討論

2.1加熱爐樣品轉換器加熱溫度及終止時(shí)間的選擇

加熱爐樣品轉換器的溫度直接影響樣品中水分的蒸發(fā)；終止條件也是影響測定結果的關(guān)鍵因素，加熱時(shí)間太短，樣品中的水分未完全蒸發(fā)，導致測定結果偏低；加熱時(shí)間太長(cháng)，則延長(cháng)了測定時(shí)間，環(huán)境因素的影響變大，因此需要選擇合適的終止時(shí)間和加熱溫度[3]。試驗分別選擇自動(dòng)終止、加熱10 min和加熱15 min作為終止條件，在不同的終止條件下分別選擇了140、150、160℃作為加熱溫度，每種條件下連續進(jìn)樣6次。結果見(jiàn)表1、表2、表3。結果表明，當選擇自動(dòng)終止條件時(shí)，三個(gè)加熱溫度的樣品結果的RSD相對較大；當選擇10 min和15 min作為終止條件時(shí)，加熱溫度為150℃和160℃時(shí)，樣品結果的差異較小。因此選擇加熱溫度150℃，終止條件為10 min比較合適。

表1自動(dòng)終止條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

表2加熱10 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

表3加熱15 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

2.2稱(chēng)樣量的選擇

在150℃加熱10 min的測定條件下，樣品稱(chēng)樣量也會(huì )對測定結果有影響[4]。分別稱(chēng)取0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09 g、0.10g、0.11g、0.12g的樣品質(zhì)量，考察樣品稱(chēng)樣量對測定結果的影響，結果見(jiàn)圖1。從圖中可以看出，儀器測得樣品水分含量隨著(zhù)加入樣品質(zhì)量的增大逐漸趨于穩定，當單次加入的樣品質(zhì)量較小時(shí)，測得結果偏高[5]。稱(chēng)量樣品質(zhì)量在50～120 mg結果無(wú)明顯差異。

圖1不同樣品質(zhì)量的測定結果

2.3費休氏試劑滴定度對測定結果的影響

在150℃加熱10 min的測定條件下，不同滴定度的費休氏試劑對測定結果有影響。分別采用滴定度為1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL的費休氏試劑，考察不同滴定度的費休氏試劑對測定結果的影響，結果見(jiàn)表4。結果表明，不同滴定度的費休氏試液對測定結果無(wú)明顯差異。

表4不同滴定度的測定結果%

2.4重復性試驗

在150℃加熱10 min的測定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費休氏試劑，用卡氏干燥爐自動(dòng)進(jìn)樣法測定樣品中水分含量，樣品測定6次，計算6次結果的相對標準偏差（RSD%）數據見(jiàn)表5。結果表明測定結果具有良好的重復性。

表5重復性試驗結果

2.5回收率試驗

在樣品中加入精密稱(chēng)取的標準水加標水平分別為0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg，在150℃加熱10 min的測定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費休氏試劑，每個(gè)加標水平重復測定3次，經(jīng)測定，加標回收率在91.8%～100.1%，結果見(jiàn)表6。

3結論

表6準確度試驗結果

本文考察了影響水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量的因素，建立了該制品水分的檢測方法。研究結果表明，加熱溫度及加熱時(shí)間對該制品水分的測定具有一定影響。實(shí)驗也考察了樣品稱(chēng)量質(zhì)量及費休氏試劑滴定度對測定結果的影響。當樣品稱(chēng)量質(zhì)量較小時(shí)，天平稱(chēng)量誤差及儀器漂移引起的誤差將對實(shí)驗結果產(chǎn)生顯著(zhù)影響，實(shí)驗結果明顯偏高；費休氏試劑滴定度對測定結果無(wú)顯著(zhù)影響。實(shí)驗使用固體標準水對實(shí)驗方法進(jìn)行確證，實(shí)驗結果相對穩定。因此，采用水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，選擇干燥爐150℃加熱10 min，樣品稱(chēng)量質(zhì)量50～120 mg作為檢測條件時(shí)，其操作過(guò)程方便簡(jiǎn)潔，且方法準確可靠，符合實(shí)際樣品的檢測需求。